Techniques microscopiques

Défaut de mise au point en éclairage spatialement cohérent

Un défaut de mise au point du microscope sur la préparation peut être vu comme l'introduction d'une fonction de transfert cohérente différente de la fonction unité dans la pupille de sortie de l'objectif (voir par exemple [ ]). Nous n'allons pas entrer ici dans la formalisation mathématique précise de ce problème dans le cadre de la double diffraction. Il suffit de réaliser qu'hormis les cas des fronts d'onde plan ou sphérique, le module de l'amplitude complexe d'une onde ne reste pas spatialement uniforme lorsque cette dernière se propage en espace libre. Ainsi, hors plan conjugué d'un objet de phase, il n'y a aucune raison que l'éclairement soit spatialement constant, et l'œil peut donc percevoir ‘quelque chose' dans l'image (tant en éclairage monochromatique qu'en éclairage polychromatique) lorsque la mise au point du microscope n'est pas bien réalisée. Toutefois, cette image n'est que très indirectement reliée à l'objet de phase de départ et par conséquent cette méthode a une utilité pratique limitée. Elle peut toutefois servir à localiser des objets de phase sur une préparation avant de mettre en œuvre des techniques de contrastes plus performantes. Cf. Figure 7d.

En éclairage spatialement incohérent, un défaut de mise au point donne un résultat fort différent puisque le formalisme du filtrage linéaire doit être appliqué aux éclairements. Puisque l'objet de départ est uniforme en éclairement, l'image l'est également quelle que soit l'importance du défaut de mise au point.

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